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Stressmarq SMC-401 抗體技術(shù)指南

更新時間:2025-04-11      點擊次數(shù):77

Stressmarq SMC-401 抗體技術(shù)指南

——高特異性α-Synuclein磷酸化抗體在神經(jīng)退行性疾病研究中的應用

一、產(chǎn)品核心特性與驗證數(shù)據(jù)

1.1 抗體基本信息

 

靶點:α-Synuclein磷酸化位點(Ser129,pS129

 

宿主/亞型:小鼠單克隆IgG1

 

反應物種:人、大鼠、小鼠(經(jīng)質(zhì)譜驗證)

 

1.2 關(guān)鍵性能參數(shù)

 

參數(shù) SMC-401 常規(guī)pS129抗體

特異性(WB驗證) 僅識別pS129 部分交叉反應

靈敏度(IHC 1:1000稀釋可用 通常需1:500

批間差異(n=5 CV<5% CV 10-15%

1.3 應用場景推薦

 

最佳適用技術(shù):

? 免疫組化(IHC)帕金森病腦切片

? 蛋白質(zhì)印跡(WB)檢測可溶性α-Synuclein

? 免疫沉淀(IP)分離病理聚集體

 

二、實驗方案優(yōu)化指南

2.1 樣本前處理關(guān)鍵點

 

組織固定:

 

4% PFA固定≤24小時(過度固定導致表位掩蔽)

 

避免酸性脫鈣劑(推薦EDTA脫鈣)

 

2.2 推薦實驗條件

IHC標準化流程:

 

復制

1. 抗原修復:檸檬酸鈉緩沖液(pH6.0,9520min)  

2. 封閉:5%驢血清 + 0.3% Triton X-100(室溫1h)  

3. 一抗孵育:SMC-401 1:1000,4℃過夜  

4. 檢測:HRP二抗+DAB顯色(避免金屬增強劑)  

WB優(yōu)化方案:

 

凝膠條件:12% Tris-Glycine凝膠

 

轉(zhuǎn)膜:0.2μm PVDF膜,100V 60min

 

封閉:5% BSA/TBST

 

三、數(shù)據(jù)解讀與問題排查

3.1 預期結(jié)果示例

 

人腦Lewy小體染色:

 

陽性信號:棕褐色顆粒狀沉積(40×可見)

 

背景控制:白質(zhì)區(qū)域無染色

 

3.2 異常結(jié)果分析

 

現(xiàn)象 可能原因 解決方案

全片非特異染色 抗原修復過度 縮短修復至10min

無目標條帶(WB 磷酸酶未被抑制 添加PhosSTOP抑制劑

斑塊染色不完整 組織脫水不充分 延長梯度乙醇脫水時間

四、技術(shù)問答(Q&A

Q1:能否檢測寡聚體形式?

 

需配合 Native-PAGE(避免SDS解聚)

 

Q2:與其他Synuclein抗體的區(qū)別?

 

SMC-401特異性:

? 不識別非磷酸化α-Synuclein

? 與β/γ-Synuclein無交叉

 

文檔增強建議:

 

插入 Lewy小體染色示例圖】 標注典型病理特征

 

添加 磷酸化驗證方案(Lambda磷酸酶處理對照)

 

關(guān)鍵步驟標注 ??警示(如"避免使用酸性脫鈣液"


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